COLÁGENO O QUE É ? COMO FUNCIONA? ONDE COMPRAR

As proteínas de colágeno exibem uma composição de aminoácidos rica em resíduos de glicina, prolina e hidroxiprolina. Devido à similaridade relativamente alta da sequência entre os diferentes tipos de colágeno, é necessário escolher padrões de colágeno com estrutura 3D nativa em vez de estrutura desnaturada.

COLÁGENO

Sob condições fisiológicas, apenas as redes nativas de colágeno podem se auto-montar em uma arquitetura tridimensional altamente específica do tipo para prender outros ingredientes, e espera-se que funcionem como estruturas celulares para a engenharia de tecidos.

Recomenda-se o uso de colágenos específicos do tipo adequadamente dobrados , exibindo estrutura terciária nativa como controle para ensaios funcionais e testando a especificidade de anticorpos anti-colágeno.

COMO EXTRAIR COLÁGENO

O colágeno é insolúvel em solventes orgânicos. O colágeno solúvel em água representa apenas uma pequena fração do colágeno total e depende da idade e do tipo de tecido extraído. A digestão limitada usando enzimas proteolíticas, como a pepsina, é um método conveniente para extrair colágeno, embora o colágeno resultante possa ser parcialmente digerido. A refrigeração contínua durante a extração de colágeno é fundamental para evitar a degradação e a desnaturação.

Em geral, os ensaios à base de colágeno requerem atenção especial ao pH, temperatura e concentração do tampão. O pH ácido é crítico para manter a estabilidade e a solubilidade dos colágenos. Como os colágenos geralmente são mais instáveis ​​do que outras proteínas, os ensaios devem ser projetados para funcionar a temperaturas <10 ° C. São necessárias concentrações ideais de colágeno para obter medições confiáveis, mas, se forem muito altas, pode resultar em polimerização espontânea (formação de gelatina) comumente ocorrida com colágenos. Um exemplo de um teste ELISA para colágeno pode ser encontrado aqui .

TESTES FEITOS COM COLÁGENO

A melhor separação de colágenos por eletroforese requer a adição de detergentes, bem como agentes redutores e caotrópicos na concentração ideal. Isso garante a resolução máxima das cadeias características, permitindo a identificação inequívoca de tipos específicos de colágeno. Devido ao tamanho variável dos diferentes colágenos, o gel de acrilamida a 6% pode ser usado para os colágenos I, II e III, enquanto o gel de acrilamida a 10% é mais adequado para os colágenos IV, V e VI.

Ao realizar western blot para colágenos, é altamente recomendável usar padrões como controles positivos e negativos para o tipo de colágeno a ser medido juntamente com um anticorpo validado.para esta aplicação. A qualidade do antígeno é importante para obter bons resultados e, portanto, é fundamental a atenção à extração de colágeno, preparação de amostras e SDS-PAGE desnaturante, conforme descrito acima.

SÍNTESE E DINÂMICA DO COLÁGENO

O colágeno é sintetizado pela primeira vez como uma molécula precursora maior chamada procolágeno, que contém peptídeos adicionais nas duas extremidades. Uma importante modificação pós-traducional precoce dos colágenos é a hidroxilação de aminoácidos prolina e lisina selecionados na proteína procolágena. Outras modificações incluem glicosilação pela adição de galactose e glicose. À medida que o procolágeno é translocado para a superfície celular, enzimas específicas chamadas proteinases de procolágeno removem ambos os peptídeos de extensão de cada extremidade da molécula.

CONCLUINDO

Nos espaços extracelulares, a reticulação nos colágenos ocorre quando as moléculas triplas de colágeno helicoidal se alinham e começam a formar fibrilas e, em seguida, fibras, que, acredita-se, afetam as propriedades mecânicas do tecido composto de fibras de colágeno, como músculo ou osso. O grau de reticulação pode afetar o rendimento de colágeno durante a extração e também afetar a exposição de alguns epítopos, exigindo assim uma otimização adicional dos métodos de recuperação de antígenos ao realizar imuno-histoquímica . Um método útil para determinar a extensão da reticulação de colágeno em um tecido é usar corantes específicos, como o picrosirius red.

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